Serodiagnosticul infecțiilor virale. Metode de diagnostic microbiologic al bolilor virale
Reacții imune utilizat în studii de diagnostic și imunologice la persoanele bolnave și sănătoase. În acest scop folosesc metode serologice , adică metode pentru studierea anticorpilor și antigenilor folosind reacții antigen-anticorp determinate în serul sanguin și alte fluide, precum și țesuturile corpului.
Detectare în ser Prezența anticorpilor împotriva antigenilor patogeni permite stabilirea unui diagnostic al bolii. Studiile serologice sunt folosite și pentru identificarea antigenelor microbiene, a diferitelor substanțe biologic active, a grupelor sanguine, a antigenelor tisulare și tumorale, a complexelor imune, a receptorilor celulari etc.
Când un microbi este izolat Agentul patogen este identificat de la pacient prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri de diagnostic imun, adică seruri de sânge ale animalelor hiperimunizate care conțin anticorpi specifici. Acesta este așa-numitul identificarea serologică microorganisme.
Folosit pe scară largă în microbiologie și imunologie reacții de aglutinare, precipitare, neutralizare, reacții care implică complement, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimunologic, imunotest enzimatic, metode de imunofluorescență). Reacțiile enumerate diferă în ceea ce privește efectul înregistrat și tehnica de producție, cu toate acestea, toate se bazează pe reacția de interacțiune a unui antigen cu un anticorp și sunt utilizate pentru a detecta atât anticorpi, cât și antigene. Reacțiile imune se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicate.
Caracteristicile interacțiunii anticorpilor cu antigenele stau la baza reactiilor de diagnostic in laboratoare. Reacţie in vitroîntre antigen și anticorp constă dintr-o fază specifică și nespecifică. ÎN faza specifica are loc legarea specifică rapidă a centrului activ al anticorpului de determinantul antigen. Apoi vine faza nespecifica - mai lent, care se manifestă prin fenomene fizice vizibile, de exemplu formarea de flocuri (fenomen de aglutinare) sau precipitat sub formă de turbiditate. Această fază necesită prezența anumitor condiții (electroliți, pH optim al mediului).
Legarea determinantului antigen (epitop) de centrul activ al fragmentului Fab de anticorpi se datorează forțelor van der Waals, legăturilor de hidrogen și interacțiunii hidrofobe. Puterea și cantitatea de antigen legat de anticorpi depind de afinitatea, aviditatea anticorpilor și de valența acestora.
Imunodeficiențe, atât primare, cât și mai ales secundare, sunt răspândite în rândul oamenilor. Ele sunt cauza multor boli și stări patologice și, prin urmare, necesită prevenire și tratament cu ajutorul medicamentelor imunotrope.
34. Vaccinuri inactivate (particulare). chitanta. Aplicație. Avantaje. Defecte.
Vaccinuri inactivate (ucise, corpusculare sau moleculare).– preparate care, ca principiu activ, includ culturi de virusuri patogeni sau bacterii ucise printr-o metodă chimică sau fizică (celulară, virionică) sau complexe antigene extrase din microbi patogeni, care conțin antigene de protecție (vaccinuri subcelulare, subvirionale).
Pentru a izola complexele antigenice (glicoproteine, LPS, proteine) de bacterii și viruși, se utilizează acid tricloracetic, fenol, enzime și precipitare izoelectrică.
Ele sunt obținute prin creșterea bacteriilor și virușilor patogene pe medii nutritive artificiale, inactivarea acestora, izolarea complexelor antigenice, purificarea lor și construirea lor sub formă de preparat lichid sau liofil.
Avantajul acestui tip de vaccin este relativa ușurință de producție (nu este necesară studiul lung și izolarea tulpinilor). Dezavantajele includ imunogenitatea scăzută, necesitatea utilizării de trei ori și reactogenitatea ridicată a vaccinurilor formalizate. De asemenea, în comparație cu vaccinurile vii, imunitatea pe care acestea o produc nu durează mult.
În prezent, se folosesc următoarele vaccinuri ucise: tifoidă, îmbogățită cu antigen Vi; vaccinul holeric, vaccinul pertussis.
Nr. 1 Reacții serologice utilizate pentru diagnostic infecții virale.
Reacțiile imune sunt utilizate în studiile de diagnostic și imunologic la persoanele bolnave și sănătoase. În acest scop folosesc metode serologice, adică metode pentru studierea anticorpilor și antigenilor folosind reacții antigen-anticorp determinate în serul sanguin și alte fluide, precum și în țesuturile corpului.
Detectarea anticorpilor împotriva antigenilor patogeni în serul sanguin al pacientului permite stabilirea unui diagnostic al bolii. Studiile serologice sunt folosite și pentru identificarea antigenelor microbiene, a diferitelor substanțe biologic active, a grupelor sanguine, a antigenelor tisulare și tumorale, a complexelor imune, a receptorilor celulari etc.
La izolarea unui microb de la un pacient, agentul patogen este identificat prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri de diagnostic imun, adică seruri de sânge ale animalelor hiperimunizate care conțin anticorpi specifici. Aceasta este așa-numita identificare serologică a microorganismelor.
În microbiologie și imunologie, reacțiile de aglutinare, precipitare, neutralizare, reacții care implică complement, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimunologice, imunotestare enzimatică, metode imunofluorescente) sunt utilizate pe scară largă. Reacțiile enumerate diferă în ceea ce privește efectul înregistrat și tehnica de producție, cu toate acestea, toate se bazează pe reacția de interacțiune a unui antigen cu un anticorp și sunt utilizate pentru a detecta atât anticorpi, cât și antigene. Reacțiile imune se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicate.
Caracteristicile interacțiunii anticorpilor cu antigenii stau la baza reacțiilor de diagnosticare în laboratoare. Reacția in vitro dintre antigen și anticorp constă într-o fază specifică și nespecifică. În faza specifică, are loc legarea specifică rapidă a centrului activ al anticorpului la determinantul antigen. Urmează apoi o fază nespecifică – una mai lentă, care se manifestă prin fenomene fizice vizibile, de exemplu formarea de fulgi (fenomen de aglutinare) sau precipitat sub formă de turbiditate. Această fază necesită prezența anumitor condiții (electroliți, pH optim al mediului).
Legarea determinantului antigen (epitop) de centrul activ al fragmentului Fab de anticorpi se datorează forțelor van der Waals, legăturilor de hidrogen și interacțiunii hidrofobe. Puterea și cantitatea de antigen legat de anticorpi depind de afinitatea, aviditatea anticorpilor și de valența acestora.
Nr. 2 Agenți cauzatori ai leishmaniozei. Taxonomie. Caracteristici. Diagnosticul microbiologic. Tratament.
Taxonomie: filul Sarcomastigophorae, subfilul Mastigophora - flageli, clasa Zoomastigophora, ordinul Kinetoplastida, genul Leishmania.
Cultivare: mediu nutritiv NNN care conține agar-sânge de iepure defibrinat. Leishmania crește și pe membrana alantoidiană corionică a embrionului de pui și în culturile celulare.
Epidemiologie: în climă caldă. Mecanismul de transmitere a agenților patogeni este transmisibil, prin mușcătura vectorilor de țânțari. Principalele surse de agenți patogeni: pentru leishmanioza antroponotică cutanată - oameni; pentru leishmanioza zoonotică cutanată - rozătoare; pentru leishmanioza viscerală - oameni; pentru leishmanioza mucocutanată - rozătoare, animale sălbatice și domestice.
Patogenie și clinică. Există doi agenți cauzali ai leishmaniozei cutanate: L. tropica - agentul cauzator al leishmaniozelor antroponotice și L. major - agentul cauzal al leishmaniozei cutanate zoonotice.
Leishmanioza cutanată antroponotică se caracterizează printr-o perioadă lungă de incubație de câteva luni. La locul mușcăturii de țânțar apare un tubercul, care se mărește și se ulcerează după 3 luni. Ulcerele sunt cel mai adesea localizate pe față și pe extremitățile superioare, cicatricile până la sfârșitul anului. Leishmanioza cutanată zoonotică (leishmanioza ulceroasă precoce, ulcerul Pendinsky, formă rurală) este mai acută. Perioada de incubație este de 2-4 săptămâni. Ulcerele plângătoare sunt cel mai adesea localizate pe extremitățile inferioare. Leishmanioza mucocutanată este cauzată de complexul Leishmania L. braziliensis; se dezvoltă leziuni granulomatoase și ulcerative ale pielii nasului, mucoaselor gurii și laringelui. Leishmanioza viscerală antraponotică este cauzată de complexul Leishmania L. donovani; La pacienti sunt afectate ficatul, splina, ganglionii limfatici, maduva osoasa si tubul digestiv.
Imunitate: persistentă pe tot parcursul vieţii
În frotiuri (de la tuberculi, conținut de ulcere, punctate din organe), colorate conform Romanovsky-Giemsa, se găsesc leishmanii mici, de formă ovală, localizate intracelular (amastigote). Pentru a izola o cultură pură a agentului patogen, se inoculează pe mediu NNN: incubare timp de 3 săptămâni. Metodele serologice nu sunt suficient de specifice. Este posibil să se utilizeze RIF, ELISA.
Testul de alergie cutanată pentru HRT la leishmanină este utilizat în studiile epidemiologice ale leishmaniozei.
Tratament: Pentru leishmanioza viscerală se folosesc preparate cu antimoniu și diamidină (pentamidină). Pentru leishmanioza cutanată - chinacrină, amfotericină.
Prevenire: distruge animalele bolnave, luptă împotriva rozătoarelor și țânțarilor. Imunoprofilaxia leishmaniozei cutanate se realizează prin inocularea unei culturi vii de L. major.
BILET#28
Nr. 1Imunoglobuline, structură și funcții.
Natura imunoglobulinelor. Ca răspuns la introducerea unui antigen, sistemul imunitar produce anticorpi - proteine care se pot lega în mod specific la antigenul care a determinat formarea lor și, astfel, participă la reacțiile imunologice. Anticorpii se referă la β-globuline, adică cea mai puțin mobilă fracțiune a proteinelor din serul sanguin din câmpul electric. În organism, β-globulinele sunt produse de celule speciale - celulele plasmatice. β-globulinele care poartă funcțiile anticorpilor se numesc imunoglobuline și sunt desemnate prin simbolul Ig. Prin urmare, anticorpii sunt imunoglobuline produse ca răspuns la introducerea unui antigen și capabile să interacționeze în mod specific cu același antigen.
Funcții. Funcția principală este interacțiunea centrelor lor activi cu determinanții lor antigen complementari. Funcția secundară este capacitatea lor de a:
Leagă un antigen pentru a-l neutraliza și a-l elimina din organism, adică a lua parte la formarea protecției împotriva antigenului;
Participa la recunoașterea antigenului „străin”;
Asigurarea cooperării celulelor imunocompetente (macrofage, limfocite T și B);
Participarea la diferite forme ale răspunsului imun (fagocitoză, funcție ucigașă, HNT, HRT, toleranță imunologică, memorie imunologică).
Structura anticorpilor. În ceea ce privește compoziția lor chimică, proteinele imunoglobulinelor sunt clasificate ca glicoproteine, deoarece constau din proteine și zaharuri; construit din 18 aminoacizi. Au diferențe de specii asociate în principal cu setul de aminoacizi. Moleculele lor sunt de formă cilindrică și sunt vizibile la microscopul electronic. Până la 80% dintre imunoglobuline au o constantă de sedimentare de 7S; rezistent la acizi slabi, alcaline, incalzire pana la 60 °C. Imunoglobulinele pot fi izolate din serul sanguin folosind metode fizice și chimice (electroforeză, precipitare izoelectrică cu alcool și acizi, sărare, cromatografia de afinitate etc.). Aceste metode sunt utilizate în producție pentru prepararea preparatelor imunobiologice.
Imunoglobulinele în funcție de structura lor, proprietățile antigenice și imunobiologice sunt împărțite în cinci clase: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imunoglobulinele M, G, A au subclase. De exemplu, IgG are patru subclase (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Toate clasele și subclasele diferă în secvența de aminoacizi.
Moleculele de imunoglobuline din toate cele cinci clase constau din lanțuri polipeptidice: două lanțuri grele H identice și două lanțuri uşoare identice L, interconectate prin punți disulfurice. În consecință, fiecare clasă de imunoglobuline, adică M, G, A, E, D, există cinci tipuri de lanțuri grele: ? (mu), ? (gama), ? (alfa), ? (epsilon) și? (delta), care diferă în antigenicitate. Lanțurile ușoare din toate cele cinci clase sunt comune și vin în două tipuri: ? (kappa) și? (lambda); Lanțurile L ale imunoglobulinelor din diferite clase se pot combina (recombina) atât cu lanțuri H omoloage, cât și cu cele heterologe. Cu toate acestea, în aceeași moleculă pot exista doar lanțuri L identice (? sau?). Ambele lanțuri H și L au o regiune variabilă - V, în care secvența de aminoacizi nu este constantă și o regiune constantă - C cu un set constant de aminoacizi. În lanțurile ușoare și grele, se disting grupările terminale NH2 și COOH.
În timpul procesării? -globulina cu mercaptoetanol descompune legăturile disulfurice iar molecula de imunoglobulină se descompune în lanțuri separate de polipeptide. Când este expusă la enzima proteolitică papaină, imunoglobulina este împărțită în trei fragmente: două fragmente necristalizante care conțin grupări determinante pentru antigen și numite fragmente Fab I și II și un fragment Fc cristalizant. Fragmentele FabI și FabII sunt similare ca proprietăți și compoziție de aminoacizi și diferă de fragmentul Fc; Fragmentele Fab și Fc sunt formațiuni compacte legate între ele prin secțiuni flexibile ale lanțului H, datorită cărora moleculele de imunoglobulină au o structură flexibilă.
Atât lanțurile H, cât și lanțurile L au regiuni compacte distincte, conectate liniar, numite domenii; sunt 4 în lanțul H și 2 în lanțul L.
Centrii activi, sau determinanți, care se formează în regiunile V ocupă aproximativ 2% din suprafața moleculei de imunoglobulină. Fiecare moleculă conține doi determinanți legați de regiunile hipervariabile ale lanțurilor H și L, adică fiecare moleculă de imunoglobulină poate lega două molecule de antigen. Prin urmare, anticorpii sunt bivalenți.
Structura tipică a unei molecule de imunoglobulină este IgG. Clasele rămase de imunoglobuline diferă de IgG prin elemente suplimentare de organizare a moleculelor lor.
Ca răspuns la introducerea oricărui antigen, pot fi produși anticorpi din toate cele cinci clase. De obicei se produce mai întâi IgM, apoi IgG, restul puțin mai târziu.
Nr. 2 Agentul cauzal al chlamidiei. Taxonomie. Caracteristici. Diagnosticul microbiologic. Tratament.
Taxonomie: ordinul Chlamydiales, familia Chlamydaceae, genul Chlamydia. Genul este reprezentat de speciile C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Bolile cauzate de chlamydia se numesc chlamydia. Bolile cauzate de C. trachomatis și C. pneumoniae sunt antroponoze. Ornitoza, cauzată de C. psittaci, este o infecție zooantroponotică.
Morfologia chlamydia: bacterii mici, gram „-”, de formă sferică. Nu formează spori, nu există flageli sau capsule. Peretele celular: membrana cu 2 straturi. Au glicolipide. Potrivit lui Gram - roșu. Principala metodă de colorare este Romanovsky-Giemsa.
2 forme de existență: corpuri elementare (particule infecțioase inactive, în afara celulei); corpuri reticulare (în interiorul celulelor, formă vegetativă).
Cultivare: Poate fi propagat numai în celule vii. În sacul vitelin al embrionilor de pui în curs de dezvoltare, în corpul animalelor sensibile și în cultura celulară
Activitatea enzimatică: mic. Fermentează acidul piruvic și sintetizează lipide. Nu sunt capabili să sintetizeze compuși cu energie înaltă.
Structura antigenică: Antigene de trei tipuri: lipopolizaharidă termostabilă specifică genului (în peretele celular). Detectat folosind RSC; antigen specific speciei de natură proteică (în membrana externă). Detectat folosind RIF; antigen specific variantei de natură proteică.
Factori de patogenitate. Proteinele membranei exterioare a chlamidiei sunt asociate cu proprietățile lor adezive. Aceste adezine se găsesc numai în corpurile elementare. Chlamydia produce endotoxină. Unele chlamydia au o proteină de șoc termic care poate provoca reacții autoimune.
Rezistenţă. Factori de mediu ridicat la diverși. Rezistent la temperaturi scăzute și uscare. Sensibilă la căldură.
C. trachomatis este un agent cauzator al bolilor sistemului genito-urinar uman, ochilor și tractului respirator.
Trahomul este o boală infecțioasă cronică caracterizată prin afectarea conjunctivei și a corneei ochilor. Antroponoza. Se transmite prin contact și contact casnic.
Patogeneza: afectează membrana mucoasă a ochilor. Pătrunde în epiteliul conjunctivei și corneei, unde se înmulțește, distrugând celulele. Se dezvoltă keratoconjunctivită foliculară.
Diagnosticare: examinarea răzuirilor din conjunctivă. În celulele afectate, colorația Romanovsky-Giemsa relevă incluziuni citoplasmatice violete situate în apropierea nucleului - corpul Provacek. Pentru a detecta antigenul specific de chlamydia în celulele afectate, sunt de asemenea utilizate RIF și ELISA. Uneori recurg la cultivarea trahomului chlamydia pe embrioni de pui sau pe culturi celulare.
Tratament: antibiotice (tetraciclina) si imunostimulante (interferon).
Prevenire: Nespecific.
Chlamydia urogenitală este o boală cu transmitere sexuală. Aceasta este o boală infecțioasă acută/cronică, care se caracterizează prin afectarea primară a tractului genito-urinar.
Infecția umană are loc prin membranele mucoase ale tractului genital. Principalul mecanism de infectare este contactul, calea de transmitere este sexuală.
Imunitate: celular, cu serul persoanelor infectate - anticorpi specifici. După o boală, nu se formează.
Diagnosticare: Pentru bolile oculare se folosește metoda bacterioscopică - se depistează incluziuni intracelulare în răzuirea din epiteliul conjunctival. Pentru a detecta antigenul chlamydia în celulele afectate, se utilizează RIF. În caz de afectare a tractului genito-urinar se poate folosi o metodă biologică, bazată pe infectarea culturii celulare cu materialul de testat (răzuire epitelială din uretră, vagin).
RIF și ELISA pot detecta antigenele chlamydia în materialul de testat. Metoda serologică – pentru depistarea IgM împotriva C. trachomatis în diagnosticul pneumoniei la nou-născuți.
Tratament. antibiotice (azitromicină din grupa macrolidelor), imunomodulatoare, eubiotice.
Prevenirea. Doar nespecific (tratamentul pacientilor), igiena personala.
Limfogranulomul venereu este o boală cu transmitere sexuală caracterizată prin afectarea organelor genitale și a ganglionilor limfatici regionali. Mecanismul infecției este contactul, calea de transmitere este sexuală.
Imunitate: imunitate persistentă, celulară și umorală.
Diagnosticare: Material pentru cercetare - puroi, biopsie din ganglionii limfatici afectați, ser de sânge. Metoda bacterioscopică, biologică (cultivarea în sacul vitelin al unui embrion de pui), serologică (RSC cu seruri pereche este pozitivă) și alergologică (test intradermic cu alergen de chlamydia).
Tratament. Antibiotice - macrolide și tetracicline.
Prevenirea: Nespecific.
C. pneumoniae este agentul cauzal al chlamidiei respiratorii, provocând bronșită și pneumonie acută și cronică. Antroponoza. Infecția este prin picături în aer. Ele intră în plămâni prin tractul respirator superior. Provoacă inflamație.
Diagnosticare: stadializarea RSC pentru a detecta anticorpi specifici (metoda serologică). În timpul infecției primare, se ia în considerare detectarea IgM. RIF este, de asemenea, utilizat pentru a detecta antigenul chlamydia și PCR.
Tratament: Acest lucru se face folosind antibiotice (tetracicline și macrolide).
Prevenirea: Nespecific.
S. psittaci este agentul cauzator al ornitozei, o boală infecțioasă acută caracterizată prin afectarea plămânilor, a sistemului nervos și a organelor parenchimatoase (ficat, splină) și intoxicație.
Zooantroponoza. Sursele de infecție sunt păsările. Mecanismul de infecție este aerogen, calea de transmitere este aerogenă. Agentul cauzal este prin mucus. scoici respiră. căi, în epiteliul bronhiilor, alveole, se înmulțește, inflamație.
Diagnosticare: Material pentru cercetare - sânge, sputa pacientului, ser sanguin pentru cercetare serologică.
Se folosește o metodă biologică - cultivarea chlamidiei în sacul vitelin al unui embrion de pui, în cultură celulară. Metoda serologică. RSK, RPGA, ELISA sunt utilizate folosind seruri de sânge asociate pacientului. Test de alergie intradermică cu ornitină.
Tratament: antibiotice (tetracicline, macrolide).
BILET#29
Nr. 1 Agentul cauzal al difteriei. Taxonomie și caracteristici. Corinebacterii patogene condiționat. Diagnosticul microbiologic. Detectarea imunității anoxice. Prevenție și tratament specific.
Difteria este o boală infecțioasă acută caracterizată prin inflamație fibrinoasă la nivelul faringelui, laringelui și mai rar în alte organe și simptome de intoxicație. Agentul său cauzator este Corynebacterium diphtheriae.
Taxonomie. Corynebacterium aparține diviziunii Firmicutes, genul Corynebacterium.
Proprietăți morfologice și tinctoriale. Agentul cauzal al difteriei se caracterizează prin polimorfism: tije subțiri, ușor curbate (cele mai frecvente) și forme cocoide și ramificate. Bacteriile sunt adesea situate într-un unghi unul față de celălalt. Nu formează spori, nu au flageli și multe tulpini au microcapsule. O trăsătură caracteristică este prezența granulelor de volutină la capetele bastonului (determinând o formă în formă de club). Agentul cauzal al petelor difteriei este pozitiv pe Gram.
Proprietăți culturale. Anaerob facultativ, optim. temperatura. Microbul crește pe medii nutritive speciale, de exemplu, pe mediul Clauberg (agar telurit de sânge), pe care bacilul difteric produce colonii de 3 tipuri: a) mari, cenușii, cu margini neuniforme, striații radiale, care amintesc de margarete; b) mici, negre, convexe, cu marginile netede; c) asemănător cu primul și cu cel de-al doilea.
În funcție de proprietățile culturale și enzimatice, se disting 3 variante biologice de C.diphtheriae: gravis, mitis și intermediar intermedius.
Activitatea enzimatică.Înalt. Fermentează glucoza și maltoza în formarea de acid, dar nu descompun zaharoza, lactoza și manitolul. Nu produc ureaza si nu formeaza indol. Produce enzima cistinază, care descompune cisteina în H 2 S. Formează catalaza, succinat dehidrogenază.
Proprietăți antigenice. Antigenele O sunt polizaharide termostabile situate adânc în peretele celular. Antigenele K sunt superficiale, termolabile, specifice gri. Cu ajutorul serurilor la antigenul K C.diph. împărțit în serovare (58).
Factori de patogenitate. O exotoxină care perturbă sinteza proteinelor și, prin urmare, afectează celulele miocardului, glandelor suprarenale, rinichilor și ganglionilor nervoși. Capacitatea de a produce exotoxină se datorează prezenței în celulă a unui profag care poartă gena tox responsabilă de formarea toxinei. Enzime de agresiune - hialuronidază, neuraminidază. Microcapsula este, de asemenea, un factor de patogenitate.
Rezistenţă. Este rezistent la uscare si la temperaturi scazute, asa ca poate ramane pe obiecte sau in apa cateva zile.
Epidemiologie. Sursa difteriei sunt persoanele bolnave. Principala cale de transmitere este de asemenea posibilă calea de contact - prin lenjerie și vase.
Patogeneza. Porțile de intrare ale infecției sunt membranele mucoase ale faringelui, nasului, tractului respirator, ochilor, organelor genitale și suprafeței plăgii. La locul porții de intrare se observă o inflamație fibrinoasă, se formează o peliculă caracteristică, care este dificil de separat de țesuturile subiacente. Bacteriile eliberează o exotoxină care intră în sânge, provocând toxinemie. Toxina afectează miocardul, rinichii, glandele suprarenale și sistemul nervos.
Clinica. Există diferite forme de localizare a difteriei: difterie a faringelui, care se observă în 85-90% din cazuri, difterie a nasului, laringelui, ochilor, organelor genitale externe, pielii, răni. Perioada de incubație variază de la 2 la 10 zile. Boala începe cu creșterea temperaturii corpului, durere la înghițire, apariția unui film pe amigdale și ganglioni limfatici măriți. Umflarea laringelui, se dezvoltă crupa de difterie, ceea ce poate duce la asfixie și moarte. Alte complicații grave care pot provoca și moartea sunt miocardita toxică și paralizia mușchilor respiratori.
Imunitate. După boală - imunitate antitoxică persistentă, intensă. De o importanță deosebită este formarea de anticorpi la fragmentul B. Aceștia neutralizează histotoxina difterică, împiedicând aceasta din urmă să se atașeze la celulă. Imunitatea antibacteriană – neîntărită, specifică gri
Diagnosticul microbiologic. Folosind un tampon, filmul și mucusul sunt prelevate din gâtul și nasul pacientului. Pentru a face un diagnostic preliminar, este posibil să utilizați metoda bacterioscopică. Principala metodă de diagnosticare este bacteriologică: cultură pe mediu Klauber II (agar cu telurit sânge), pe mediu seric solid pentru depistarea producției de cistinază, pe mediu Hiss, pe mediu pentru determinarea toxicității agentului patogen. Identificarea intraspecifică constă în determinarea bio- și serovar. Pentru detectarea accelerată a toxinei difterice se utilizează: IRHA (reacție de hemaglutinare indirectă) cu un diagnostic de eritrocite anticorpi, reacție de neutralizare a anticorpilor (prezența toxinei se apreciază după efectul de prevenire a hemaglutinării); RIA (testul radioimun) și ELISA (testul imunosorbent enzimatic).
Tratament. Principala metodă de terapie este administrarea imediată a serului de cal antidifteric specific antitoxic. Imunoglobulină umană anti-difterică pentru administrare intravenoasă.
Vaccinuri asociate: DPT (vaccin pertussis-tetanos absorbit), ADS (anatoxina difteric-tetanica absorbita).
Nr. 2 Clase de imunoglobuline, caracteristicile lor.
Imunoglobulinele în funcție de structura lor, proprietățile antigenice și imunobiologice sunt împărțite în cinci clase: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Clasa de imunoglobuline G. Izotipul G constituie cea mai mare parte a Ig din serul sanguin. Reprezintă 70-80% din toate Ig serice, cu 50% conținute în lichidul tisular. Conținutul mediu de IgG din serul sanguin al unui adult sănătos este de 12 g/l. Timpul de înjumătățire al IgG este de 21 de zile.
IgG este un monomer, are 2 centri de legare a antigenului (poate lega simultan 2 molecule de antigen, prin urmare, valența sa este de 2), o greutate moleculară de aproximativ 160 kDa și o constantă de sedimentare de 7S. Există subtipuri Gl, G2, G3 și G4. Sintetizată de limfocitele B mature și plasmocite. Este bine detectat în serul sanguin la vârful răspunsului imun primar și secundar.
Are afinitate mare. IgGl și IgG3 leagă complementul, G3 fiind mai activ decât Gl. IgG4, ca și IgE, are citofilitate (tropism, sau afinitate, pentru mastocite și bazofile) și este implicată în dezvoltarea reacției alergice de tip I. În reacțiile de imunodiagnostic, IgG se poate manifesta ca un anticorp incomplet.
Trece cu ușurință prin bariera placentară și oferă imunitate umorală nou-născutului în primele 3-4 luni de viață. De asemenea, este capabil să fie secretat în secrețiile membranelor mucoase, inclusiv în lapte prin difuzie.
IgG asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului, declanșează citoliza mediată de complement și citotoxicitatea mediată celulară dependentă de anticorpi.
Clasa de imunoglobuline M. Cea mai mare moleculă dintre toate Ig-urile. Acesta este un pentamer care are 10 centri de legare a antigenului, adică valența sa este de 10. Greutatea sa moleculară este de aproximativ 900 kDa, constanta de sedimentare este 19S. Există subtipurile Ml și M2. Lanțurile grele ale moleculei IgM, spre deosebire de alte izotipuri, sunt construite din 5 domenii. Timpul de înjumătățire al IgM este de 5 zile.
Reprezintă aproximativ 5-10% din toate Ig-urile serice. Conținutul mediu de IgM în serul sanguin al unui adult sănătos este de aproximativ 1 g/l. Acest nivel la om este atins până la vârsta de 2-4 ani.
IgM este filogenetic cea mai veche imunoglobulina. Sintetizată de precursori și limfocitele B mature. Se formează la începutul răspunsului imun primar și este, de asemenea, primul care este sintetizat în corpul unui nou-născut - este determinat deja în a 20-a săptămână de dezvoltare intrauterină.
Are aviditate mare și este cel mai eficient activator al complementului prin calea clasică. Participă la formarea imunității umorale serice și secretoare. Fiind o moleculă de polimer care conține un lanț J, poate forma o formă secretorie și poate fi secretată în secreții mucoase, inclusiv în lapte. Majoritatea anticorpilor normali și izoaglutininelor sunt IgM.
Nu trece prin placenta. Detectarea anticorpilor specifici ai izotipului M în serul sanguin al unui nou-născut indică o infecție intrauterină anterioară sau un defect placentar.
IgM asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului, declanșează citoliza mediată de complement și citotoxicitatea mediată celulară dependentă de anticorpi.
Imunoglobulina de clasa A Există în forme serice și secretoare. Aproximativ 60% din toate IgA sunt conținute în secrețiile mucoase.
IgA serică: Reprezintă aproximativ 10-15% din toate Ig-urile serice. Serul de sânge al unui adult sănătos conține aproximativ 2,5 g/l IgA, maximul fiind atins până la vârsta de 10 ani. Timpul de înjumătățire al IgA este de 6 zile.
IgA este un monomer, are 2 centri de legare la antigen (adică 2-valent), o greutate moleculară de aproximativ 170 kDa și o constantă de sedimentare de 7S. Există subtipuri A1 și A2. Sintetizată de limfocitele B mature și plasmocite. Este bine detectat în serul sanguin la vârful răspunsului imun primar și secundar.
Are afinitate mare. Poate fi un anticorp incomplet. Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară.
IgA asigură neutralizarea, opsonizarea și marcarea antigenului și declanșează citotoxicitatea mediată celular dependentă de anticorpi.
IgA secretorie: Spre deosebire de ser, sIgA secretorie există sub formă polimerică sub formă de di- sau trimer (4- sau 6-valent) și conține peptide J și S. Masa moleculară 350 kDa și mai mare, constantă de sedimentare 13S și mai mare.
Este sintetizat de limfocitele B mature și descendenții acestora - celulele plasmatice de specializarea corespunzătoare numai în interiorul mucoaselor și este secretat în secrețiile acestora. Volumul de producție poate ajunge la 5 g pe zi. Bazinul slgA este considerat cel mai numeros din organism - cantitatea sa depășește conținutul total de IgM și IgG. Nu este detectat în serul de sânge.
Forma secretorie a IgA este principalul factor în imunitatea locală umorală specifică a mucoaselor tractului gastro-intestinal, sistemului genito-urinar și tractului respirator. Datorită lanțului S, este rezistent la proteaze. slgA nu activează complementul, dar se leagă eficient de antigeni și îi neutralizează. Previne aderarea microbilor pe celulele epiteliale și generalizarea infecției în mucoasele.
Imunoglobuline clasa E. Denumită și reagină. Conținutul în ser sanguin este extrem de scăzut - aproximativ 0,00025 g/l. Detectarea necesită utilizarea unor metode speciale de diagnosticare extrem de sensibile. Greutate moleculară - aproximativ 190 kDa, constantă de sedimentare - aproximativ 8S, monomer. Reprezintă aproximativ 0,002% din toate Ig-urile circulante. Acest nivel este atins la vârsta de 10-15 ani.
Este sintetizat de limfocitele B mature și celulele plasmatice în principal în țesutul limfoid al arborelui bronhopulmonar și tractul gastrointestinal.
Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară. Are o citofilie pronunțată - tropism pentru mastocite și bazofile. Participă la dezvoltarea reacției de hipersensibilitate de tip imediat - tip I.
Clasa de imunoglobuline D. Nu există prea multe informații despre Ig din acest izotip. Conținut aproape complet în serul sanguin la o concentrație de aproximativ 0,03 g/l (aproximativ 0,2% din totalul Ig circulant). IgD are o greutate moleculară de 160 kDa și o constantă de sedimentare de 7S, monomer.
Nu leagă complementul. Nu trece prin bariera placentară. Este un receptor pentru precursorii limfocitelor B.
BILET#30
Nr. 1 Agentul cauzal al amibiazei. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament specific.
Taxonomie: filul Sarcomastigophorae, subfilul Sarcodina, clasa Lobosia, ordinul Amoebida.
Morfologie: Există două etape de dezvoltare a agentului patogen: vegetativă și chistică. Stadiul vegetativ are mai multe forme: vegetativ mare (țesut), vegetativ mic; formă prechistică, asemănătoare celei luminale, formând chisturi.
Chistul (etapa de repaus) are formă ovală. Un chist matur conține 4 nuclei. Forma luminală este inactivă, trăiește în lumenul părții superioare a intestinului gros ca un comensal inofensiv, hrănindu-se cu bacterii și detritus.
O formă vegetativă mare se formează, în anumite condiții, dintr-o formă vegetativă mică. Este cel mai mare, formează pseudopode și are mișcare. Poate fagocita celulele roșii din sânge. Se găsește în fecale proaspete în timpul amibiazei.
Cultivare: pe medii bogate în nutrienți.
Rezistenţă:În afara corpului, formele vegetative ale agentului patogen mor rapid (în decurs de 30 de minute). Chisturile sunt persistente în mediu și persistă în fecale și apă. În alimente, legume și fructe, chisturile persistă câteva zile. Mor când sunt fierte.
Epidemiologie: Amebiaza este o boală antroponotică; sursa invaziei sunt oamenii. Mecanismul de transmitere este fecal-oral. Infecția apare atunci când chisturile sunt introduse prin alimente, apă sau articole de uz casnic.
Patogeneza si clinica: Chisturile care intră în intestin și formele luminale de amibe care apoi se formează din ele pot trăi în intestinul gros fără a provoca boli. Când rezistența organismului scade, amibele pătrund în peretele intestinal și se înmulțesc. Se dezvoltă amebiaza intestinală.
Trofozoiții sub formă de țesut sunt mobili datorită formării pseudopodiilor. Ele pătrund în peretele colonului, provocând necroză; capabil de a fagocita celulele roșii din sânge; poate fi găsit în fecalele umane. Odată cu necroză, se formează ulcere. Clinic, amebiaza intestinală se manifestă sub formă de scaune frecvente, moale, sângeroase, însoțite de febră și deshidratare. Puroi și mucus, uneori cu sânge, se găsesc în scaun.
Amebele cu fluxul sanguin pot intra în ficat, plămâni și creier, ducând la dezvoltarea amoebiazei extraintestinale.
Imunitate: Instabil, predominant componenta celulară este activată.
Diagnosticul microbiologic. Metoda principală este examinarea microscopică a scaunului pacientului, precum și conținutul abceselor organelor interne. Frotiurile sunt colorate cu soluție Lugol sau hematoxilină. Teste serologice (RNGA, ELISA, RSK): cel mai mare titru de anticorpi din serul sanguin este detectat cu amibiaza extraintestinală.
Tratament: Se utilizează metronidazol și furamidă.
Prevenire: identificarea și tratarea excretorilor de chisturi și purtătorilor de amibe, cu aplicarea măsurilor sanitare generale.
Nr. 2 interferoni. Natura, metode de producție. Aplicație.
Interferonii sunt glicoproteine produse de celule ca răspuns la infecția virală și la alți stimuli. Ele blochează reproducerea virusului în alte celule și participă la interacțiunea celulelor sistemului imunitar. Există două grupe serologice de interferoni: tip I - IFN-? şi IFN -?; Tipul II - IFN-.? Interferonii de tip I au efecte antivirale și antitumorale, în timp ce interferonii de tip II reglează răspunsul imun specific și rezistența nespecifică.
Interferonul (leucocitul) este produs de celulele albe din sânge tratate cu viruși și alți agenți. β-interferonul (fibroblastul) este produs de fibroblastele tratate cu virusuri.
IFN de tip I, prin legarea de celulele sănătoase, le protejează de viruși. Efectul antiviral al IFN-ului de tip I se poate datora și faptului că este capabil să inhibe proliferarea celulară prin interferarea cu sinteza aminoacizilor.
IFN-? produs de limfocitele T și NK. Stimulează activitatea limfocitelor T și B, monocitelor/macrofagelor și neutrofilelor. Induce apoptoza macrofagelor activate, keratinocitelor, hepatocitelor, celulelor măduvei osoase, celulelor endoteliale și suprimă apoptoza monocitelor periferice și a neuronilor infectați cu herpes.
Interferonul leucocitar modificat genetic este produs în sistemele procariote (Escherichia coli). Biotehnologie pentru producerea interferonului leucocitar include următoarele etape: 1) tratamentul masei leucocitelor cu inductori de interferon; 2) izolarea unui amestec de ARNm din celulele tratate; 3) obţinerea de ADN complementar total folosind transcriptază inversă; 4) inserarea cADN-ului în plasmida E. coli și donarea acesteia; 5) selecţia clonelor care conţin gene de interferon; 6) includerea unui promotor puternic în plasmidă pentru transcrierea cu succes a genei; 7) expresia genei interferonului, i.e. sinteza proteinei corespunzătoare; 8) distrugerea celulelor procariote și purificarea interferonului folosind cromatografia de afinitate.
interferoni aplica pentru prevenirea și tratarea unui număr de infecții virale. Efectul lor este determinat de doza medicamentului, dar dozele mari de interferon au un efect toxic. Interferonii sunt utilizați pe scară largă pentru gripă și alte boli respiratorii acute. Medicamentul este eficient în stadiile incipiente ale bolii și se aplică local. Interferonii au un efect terapeutic împotriva hepatitei B, herpesului și, de asemenea, împotriva neoplasmelor maligne.
Cuprins al subiectului „Metode de detectare a virusurilor. Metode de diagnosticare a micozelor (boli fungice). Metode de depistare a protozoarelor.”:Metode serologice de diagnosticare a infecțiilor virale. Inhibarea hemaglutinării. Inhibarea efectului citopatic prin interferența virală. Imunofluorescență directă. Microscopia imunoelectronică.
Cu majoritate infecții virale se dezvoltă reacții imune care sunt obișnuite diagnostice. Răspunsurile celulare sunt de obicei evaluate în teste de citotoxicitate limfocitelor împotriva agenților infecțioși sau a celulelor țintă infectate de aceștia sau se determină capacitatea limfocitelor de a răspunde la diferite Ag și mitogeni. În laboratoarele practice, severitatea reacțiilor celulare este rareori determinată. Metodele de identificare a AT antivirale au devenit mai răspândite.
PH se bazează pe suprimarea efectului citopatogen după amestecarea virusului cu AT specific. Virusul necunoscut este amestecat cu antiseruri comerciale cunoscute și, după incubarea corespunzătoare, adăugat la monostratul celular. Absența morții celulare indică o discrepanță între agentul infecțios și AT cunoscute.
Inhibarea hemaglutinării
RTGA este folosit pentru a identifica viruși, capabil să aglutine diferite globule roșii. Pentru a face acest lucru, amestecați mediul de cultură care conține agentul patogen cu un antiser comercial cunoscut și adăugați-l la cultura celulară. După incubare, se determină capacitatea de hemaglutinare a culturii și, în absența acesteia, se ajunge la concluzia că virusul nu se potrivește cu antiserul.
Inhibarea efectului citopatic prin interferența virală
Reacția de inhibare a efectului citopatic datorită interferenței virusurilor utilizat pentru a identifica un agent patogen care interferează cu un virus citopatogen cunoscut într-o cultură de celule sensibile. Pentru a face acest lucru, se adaugă ser comercial în mediul de cultură care conține virusul studiat (de exemplu, la virusul rubeolei dacă este suspectat), se incubează și se infectează o a doua cultură; după 1-2 zile, se introduce în el un virus citopatogen cunoscut (de exemplu, orice virus ECHO). Dacă este prezent un efect citopatogen, se ajunge la concluzia că prima cultură a fost infectată cu un virus corespunzător AT utilizat.
Imunofluorescență directă
Printre alte teste, cel mai utilizat este reacție directă de imunofluorescență(cel mai rapid, mai sensibil și reproductibil). De exemplu, identificarea CMV prin efectul său citopatogen necesită cel puțin 2-3 săptămâni, iar atunci când se utilizează AT monoclonal marcat, identificarea este posibilă în 24 de ore Având un set de astfel de reactivi, aceștia pot fi adăugați la culturile infectate cu virusul. incubat, spălat reactivul nelegat și examinați utilizând microscopia cu fluorescență (vă permite să detectați prezența fluorescenței celulelor infectate).
Microscopia imunoelectronică
Microscopia imunoelectronică(analog cu metoda anterioară) vă permite să identificați diferite tipuri de viruși identificați prin microscopie electronică (de exemplu, diferite tipuri de virusuri herpetice), ceea ce nu se poate face pe baza caracteristicilor morfologice. În loc de antiseruri, AT etichetate în moduri diferite sunt utilizate pentru identificare, dar complexitatea și costul ridicat al metodei limitează utilizarea acesteia.
Se bazează pe determinarea anticorpilor antivirali în sângele pacientului în reacții serologice folosind antigene virale specifice - diagnosticums sau sisteme speciale de testare. Reacțiile serologice pentru infecțiile virale se efectuează într-un mediu lichid (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), într-un gel (RPG, RRG, RVIEF) sau pe un purtător în fază solidă (de exemplu, pe pereții o placă de polistiren cu una dintre componentele răspunsului imun - antigen sau anticorp). Astfel de metode în fază solidă sunt cunoscute ca ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Adesea, din cauza prezenței anticorpilor antivirali naturali în sângele majorității oamenilor sănătoși, diagnosticul serologic al infecțiilor virale se bazează pe studiu. seruri asociate, luate la începutul şi la apogeul bolii sau în perioada de convalescenţă pentru a determina creşterea titrului de anticorpi. O creștere a titrului de anticorpi de patru ori sau mai mult este considerată semnificativă din punct de vedere diagnostic.
Creșterea sensibilității metodelor serologice se realizează prin adsorbția de antigene sau anticorpi pe eritrocite (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), marcare cu enzime (ELISA), izotopi radioactivi (RIA, RPG) sau fluorocromi (RIF). a lizei eritrocitelor (ca indicator) este utilizată și sistemele) în timpul interacțiunii antigenelor și anticorpilor în prezența complementului (RSK, RRG).
Reacția de fixare a complementului (CFR) sub forma unei variante de fixare a complementului la rece (peste noapte la o temperatură de +4 0 C) este adesea folosit în virologie pentru diagnosticarea retrospectivă a unui număr de infecții virale și pentru determinarea antigenelor specifice virusului în materiale din pacientii.
Reacția de hemoliză radială (RHR)în gel de agaroză se bazează pe fenomenul de hemoliză a eritrocitelor sensibilizate de un antigen sub influența anticorpilor specifici virusului în prezența complementului și este utilizat pentru diagnosticul serologic al infecțiilor gripale, ARVI, rubeolă, oreion și togavirus.
Pentru a stabili reacția, se adaugă 0,1 ml de antigen viral nediluat la eritrocitele de oaie (0,3 ml dintr-o suspensie 10%) și amestecul este menținut timp de 10 minute la temperatura camerei. Se adaugă 0,3 ml eritrocite sensibilizate și 0,1 ml complement la 1,2% agaroză la o temperatură de 42 0 C, amestecul se toarnă pe lame de sticlă sau în godeurile plăcilor de polistiren, se decupează găurile în gelul de agaroză solidificat folosind un punch și umplut cu serurile de control. Sticla sau panourile se acoperă cu un capac și se pun într-o cameră umedă timp de 16-18 ore într-un termostat. Reacția este măsurată prin diametrul zonei de hemoliză din jurul orificiilor umplute cu ser. Nu există hemoliză în control.
119. Teste serologice utilizate pentru diagnosticarea infecţiilor virale.
Detectare în ser Prezența anticorpilor împotriva antigenilor patogeni permite stabilirea unui diagnostic al bolii. Studiile serologice sunt folosite și pentru identificarea antigenelor microbiene, a diferitelor substanțe biologic active, a grupelor sanguine, a antigenelor tisulare și tumorale, a complexelor imune, a receptorilor celulari etc.
Când un microbi este izolat Agentul patogen este identificat de la pacient prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri de diagnostic imun, adică seruri de sânge ale animalelor hiperimunizate care conțin anticorpi specifici. Acesta este așa-numitul identificarea serologică microorganisme.
Folosit pe scară largă în microbiologie și imunologie reacții de aglutinare, precipitare, neutralizare, reacții care implică complement, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimunologic, imunotest enzimatic, metode de imunofluorescență). Reacțiile enumerate diferă în ceea ce privește efectul înregistrat și tehnica de producție, cu toate acestea, toate se bazează pe reacția de interacțiune a unui antigen cu un anticorp și sunt utilizate pentru a detecta atât anticorpi, cât și antigene. Reacțiile imune se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicate.
Caracteristicile interacțiunii anticorpilor cu antigenele stau la baza reactiilor de diagnostic in laboratoare. Reacţie in vitroîntre antigen și anticorp constă dintr-o fază specifică și nespecifică. ÎN faza specifica are loc legarea specifică rapidă a centrului activ al anticorpului de determinantul antigen. Apoi vine faza nespecifica - mai lent, care se manifestă prin fenomene fizice vizibile, de exemplu formarea de flocuri (fenomen de aglutinare) sau precipitat sub formă de turbiditate. Această fază necesită prezența anumitor condiții (electroliți, pH optim al mediului).
Legarea determinantului antigen (epitop) de centrul activ al fragmentului Fab de anticorpi se datorează forțelor van der Waals, legăturilor de hidrogen și interacțiunii hidrofobe. Puterea și cantitatea de antigen legat de anticorpi depind de afinitatea, aviditatea anticorpilor și de valența acestora.
La întrebarea despre diagnosticarea expresă:
1. O cultură izolată în forma sa pură poate fi diagnosticată. 2. În laboratoare special echipate (trebuie să aibă permisiunea) 3. Respectarea unor reguli stricte precum: cameră izolată, costume speciale de protecție necesare, igienizarea completă obligatorie a încăperii după lucrul cu agentul patogen, igienizarea cercetătorilor după terminarea lucrărilor. Metode de diagnosticare expert. 1. Bacteriologie - medii nutritive politropice combinate pentru studiul rapid al morfelor, tinctorului, biochimic. proprietăți. Utilizarea benzii indicatoare enzimatice, metoda electrofizică, metoda discurilor de hârtie înmuiate în diverse substanțe (glucoză, lactoză etc.) 2. Diagnosticarea fagilor. 3. Serodiagnostic - metoda Mancini, precipitare in gel conform Ascoli, RA, RPGA. 4. Bacterioscopie - RIF direct și indirect. Metode de diagnostic expres pentru: Holera - M.Z Ermolyeva, stație de imobilizare cu ser de diagnosticare a holerei, RIF. Tularemia - RA pe sticlă, RPGA Chume - tipărirea fagilor, metoda discului de hârtie cu carbohidrați, RPGA. Ulcer sinusal - metoda Ascoli, RIF, RPGA. Model de creștere: există trei dintre ele: difuz (anaerobi facultativi), fund (anaerobi obligatorii) și de suprafață (aerobi obligatorii).
Izolarea unei culturi pure de bacterii anaerobe
În practica de laborator, va trebui adesea să lucrați cu microorganisme anaerobe. Sunt mai pretențioși față de mediile nutritive decât aerobii, necesită mai des aditivi speciali de creștere, necesită oprirea accesului la oxigen în timpul cultivării lor, iar durata lor de creștere este mai lungă. Prin urmare, lucrul cu ei este mai complex și necesită o atenție semnificativă din partea bacteriologilor și tehnicienilor de laborator.
Este important să se protejeze materialul care conține agenți patogeni anaerobi de efectele toxice ale oxigenului atmosferic. Prin urmare, se recomandă prelevarea materialului din focarele de infecție purulentă în timpul puncției cu ajutorul unei seringi, timpul dintre luarea materialului și inocularea acestuia pe un mediu nutritiv trebuie să fie cât mai scurt posibil.
Deoarece mediile nutritive speciale sunt folosite pentru cultivarea bacteriilor anaerobe, care nu ar trebui să conțină oxigen și să aibă un potențial redox scăzut (-20 -150 mV), la compoziția lor se adaugă indicatori - resazurină, albastru de metilen etc., care reacționează la o modificare. în acest potențial. Pe măsură ce crește, formele incolore ale indicatorilor sunt restaurate și își schimbă culoarea: resazurina devine roz mediu, iar albastrul de metilen devine albastru mediu. Astfel de modificări indică imposibilitatea utilizării mediilor pentru cultivarea microbilor anaerobi.
Introducerea în mediu a cel puțin 0,05% agar ajută la reducerea potențialului redox, care, prin creșterea vâscozității acestuia, ajută la reducerea aportului de oxigen. Acest lucru, la rândul său, se realizează și prin utilizarea mediului proaspăt (nu mai târziu de două ore de la producție) și a mediilor nutritive reduse.
Trebuie avut în vedere faptul că, datorită particularităților tipului fermentativ de metabolism al bacteriilor anaerobe, acestea necesită medii mai bogate în componente nutriționale și vitamine. Cele mai utilizate sunt infuziile inimă-creier și ficat, extractele de soia și drojdie, digerarea hidrolitică de cazeină, peptonă, triptonă. Este obligatoriu să adăugați factori de creștere precum Tween-80, hemină, menadionă, sânge integral sau hemolizat.
Izolarea unei culturi pure de microorganisme aerobe constă dintr-un număr de etape. În prima zi (etapa 1 a studiului), materialul patologic este preluat într-un recipient steril (eprubetă, balon, sticlă). Este studiat pentru aspectul, consistența, culoarea, mirosul și alte caracteristici, se prepară un frotiu, se pictează și se examinează la microscop. În unele cazuri (gonoree acută, ciuma), în acest stadiu este posibil să se facă un diagnostic anterior și, în plus, să se selecteze mediul pe care va fi inoculat materialul. Ocuparea se efectuează cu o buclă bacteriologică (folosită cel mai des), folosind o spatulă folosind metoda Drigalsky și un tampon de tifon de bumbac. Cupele se inchid, se intorc cu susul in jos, se semneaza cu un creion special si se pun intr-un termostat la temperatura optima (37°C) timp de 18-48 de ani. Scopul acestei etape este obținerea de colonii izolate de microorganisme. Cu toate acestea, uneori, pentru a acumula material, acesta este semănat pe medii nutritive lichide.
Frotiurile sunt preparate din colonii suspecte, colorate folosind metoda Gram pentru a studia proprietățile morfologice și tinctoriale ale agenților patogeni, iar bacteriile mobile într-o picătură „atârnată” sau „zdrobită” sunt examinate. Aceste semne au o valoare diagnostică extrem de mare atunci când se caracterizează anumite tipuri de microorganisme. Rămășițele coloniilor studiate sunt îndepărtate cu grijă de pe suprafața mediului fără a atinge altele și inoculate pe colțuri de agar sau pe sectoare ale unei plăci Petri cu un mediu nutritiv pentru a obține o cultură pură. Eprubete sau vase cu culturi se pun într-un termostat la temperatura optimă timp de 18-24 de ore.
Bacteriile pot crește diferit și pe mediile nutritive lichide, deși caracteristicile manifestărilor de creștere sunt mai sărace decât pe mediile solide.
Bacteriile sunt capabile să provoace turbiditate difuză a mediului, culoarea acestuia poate să nu se schimbe sau să dobândească culoarea unui pigment. Acest model de creștere este cel mai adesea observat la majoritatea microorganismelor anaerobe facultative.
Uneori se formează un precipitat în partea de jos a eprubetei. Poate fi sfărâmicios, omogen, vâscos, mucos, etc. Mediul de deasupra poate rămâne transparent sau deveni tulbure. Dacă microbii nu formează pigment, sedimentul are o culoare albastru-albastru sau gălbui. De regulă, bacteriile anaerobe cresc într-un mod similar.
Creșterea parietală se manifestă prin formarea de fulgi și boabe atașate de pereții interiori ai eprubetei. Mediul rămâne transparent.
Bacteriile aerobe au tendința de a crește superficial. O peliculă delicată, incoloră sau albăstruie se formează adesea sub forma unui strat abia vizibil la suprafață, care dispare atunci când mediul este scuturat sau agitat. Pelicula poate fi umedă, groasă, să aibă o consistență stringentă, moale și să se lipească de buclă, trăgând în spatele ei. Cu toate acestea, există și o peliculă densă, uscată, casantă, a cărei culoare depinde de pigmentul produs de microorganisme.
Dacă este necesar, se face un frotiu, se colorează, se examinează la microscop, iar microorganismele sunt inoculate cu o ansă pe suprafața unui mediu nutritiv solid pentru a obține colonii izolate.
În a treia zi (etapa 3 a studiului), se studiază modelul de creștere al unei culturi pure de microorganisme și se realizează identificarea acesteia.
În primul rând, acordă atenție caracteristicilor de creștere a microorganismelor pe mediu și fac un frotiu, colorându-l folosind metoda Gram, pentru a verifica puritatea culturii. Dacă la microscop sunt observate bacterii cu același tip de morfologie, dimensiune și proprietăți tinctoriale (capacitate de vopsire), se ajunge la concluzia că cultura este pură. În unele cazuri, pe baza aspectului și caracteristicilor creșterii lor, se poate trage o concluzie despre tipul de agenți patogeni izolați. Determinarea speciilor de bacterii pe baza caracteristicilor lor morfologice se numește identificare morfologică. Determinarea tipului de agent patogen pe baza caracteristicilor sale culturale se numește identificare culturală.
Cu toate acestea, aceste studii nu sunt suficiente pentru a face o concluzie finală despre tipul de microbi izolați. Prin urmare, sunt studiate proprietățile biochimice ale bacteriilor. Sunt destul de diverse.
Cel mai adesea, sunt studiate proprietăți zaharolitice, proteolitice, peptolitice, hemolitice, formarea enzimelor decarboxilază, oxidază, catalază, plasmacoagulază, DNază, fibrinolizină, reducerea nitraților în nitriți și altele asemenea. În acest scop, există medii nutritive speciale care sunt inoculate cu microorganisme (serie Hiss pestriță, MPB, zer coagulat, lapte etc.).
Determinarea tipului de agent patogen pe baza proprietăților sale biochimice se numește identificare biochimică.
METODE DE CULTIVARE SI IZOLARE A CULTURII PURE A BACTERIILOR Pentru o cultivare cu succes, pe langa mediile corect selectate si insamantate corespunzator, sunt necesare conditii optime: temperatura, umiditatea, aerarea (alimentarea cu aer). Cultivarea anaerobilor este mai dificilă decât aerobii pentru a elimina aerul din mediul nutritiv. Izolarea tipurilor individuale de bacterii (cultură pură) din materialul de testat, care de obicei conține un amestec de diferite microorganisme, este una dintre etapele oricărui studiu bacteriologic. O cultură pură de microbi se obține dintr-o colonie microbiană izolată. Când se izolează o cultură pură din sânge (hemocultură), aceasta este mai întâi „crescut” într-un mediu lichid: 10-15 ml de sânge prelevat steril se inoculează în 100-150 ml de mediu lichid. Raportul dintre sângele inoculat și mediul nutritiv de 1:10 nu este întâmplător - așa se realizează diluarea sângelui (sângele nediluat are un efect dăunător asupra microorganismelor). Etapele izolării unei culturi pure de bacterii Etapa I (material nativ) Microscopie (idee aproximativă a microflorei). Semănat pe medii nutritive solide (obținerea coloniilor). Etapa II (colonii izolate) Studiul coloniilor (proprietățile culturale ale bacteriilor). Studiul microscopic al microbilor într-un frotiu colorat (proprietățile morfologice ale bacteriilor). Semănatul pe agar agar nutritiv pentru a izola o cultură pură. Etapa III (cultură pură) Determinarea proprietăților culturale, morfologice, biochimice și de altă natură pentru identificarea unei culturi bacteriene IDENTIFICAREA BACTERIILOR Identificarea culturilor bacteriene izolate se realizează prin studierea morfologiei bacteriilor, a caracteristicilor culturale, biochimice și a altor caracteristici inerente fiecărei specii. .